对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤！尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞!我不推荐用该方法检测!因为其重复性较差，且需要操作时非常小心!消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC，最终导致染色失败！细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品！
因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一!AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的AnnexinV作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生!碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红！
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AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒包装规格产品货号：An0020、An0050、An0100规格：20T、50T、100T储存条件4ºC保存，一年有效产品介绍：磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面.AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合!
微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用!PropidiumIodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触！AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠（NaN3）,操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。本试剂盒用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1x106。染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加.AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。
组织细胞凋亡检测
2）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清。3）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清.b)贴壁细胞：1）吸出细胞培养液至离心管中，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞.2）室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化!3）加入以上步骤中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清。
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