操作步骤
第1步：样本处理
a.细胞培养上清
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b. 生物药或需遵循药典的样本
说明：①样品基质可能会影响检测的灵敏度。收集和筛选更高的样品量可提高测定灵敏度。
②细胞培养物样本含丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原DNA，影响检测灵敏度。
建议：样本做DNA抽提处理，实现高灵敏度。
推荐：德国MB公司生产的专用支原体DNA提取试剂盒
Venor® Gem Sample Preparation Kit
该DNA抽提试剂盒已经过广泛验证。
第2步：试剂制备
a. 冻干粉溶解
b. 反应体系制备
b1) 样品为细胞上清筛查——反应体系制备
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第3步：启动荧光定量PCR仪
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第4步：结果判别
FAM通道：检测支原体荧光信号。HEX通道：检测内控对照荧光信号。
支原体DNA和内控DNA存在信号的竞争性抑制。
支原体DNA越多，FAM通道信号越高，检测内控对照的HEX通道信号越低。
定量需基于Ct值和DNA标准曲线。
Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。
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