酵母单杂交文库

真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由DNA结合结构域(DNA—bindingdomain，BD)和转录激活结构域(activationdomain，AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体，顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体，分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstreamactivatingsequence,UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。基因转录实际上是转录调控因子和启动子区各种顺式作用元件相互作用的结果，这种结合犹如蛋白质与蛋白质的互作一样具有特异性，这是研究顺式作用元件即DNA序列与蛋白质互作的基础。我公司总经理毕业于华中农业大学生化与分子生物学专业，博士期间长期从事酵母单/双杂交文库构建及筛选（Clontech体系，针对胞浆蛋白和核蛋白）的工作，在校期间为实验室构建了3个高效的水稻酵母双杂交文库（组织分别为水稻叶片，幼穗，种子），具有丰富的实践经验。本公司在RNA抽提，mRNA纯化，酵母转化等步骤中对于试剂选择有着独到的见解，用性价比最高的试剂为客户节约成本。同时公司对于反转录，酵母转化，酵母菌落PCR等步骤进行优化，使得初始基因丰度更高，最大程度保证互作基因/蛋白不致遗漏；转化效率更高，提高弱互作因子筛到的可能性；均一化更高，降低重复筛到概率；空载体更少，高效并且节约成本。通过RNA提取，mRNA分离，cDNA合成，cDNA长度分级，分级后的cDNA与酵母单杂交载体(pGADT7-Rec2）进行infusion重组，重组后产物转化感受态细胞，文库铺板检测与菌液保存获得插入片段＞500bp（插入片段不是越长越好，较长的片段可能会漏筛部分较小片段的互作基因），重组率＞90%，库容≥1x108transformants，滴度≥2x107cfu/ml的酵母单杂交文库。客户提供新鲜组织或细胞，25个工作日交付酵母单杂交文库构建报告（电子版），酵母单杂交文库构建图片（电子版），转化到酵母细胞的单杂交文库甘油菌100ml。可用于酵母单杂交，酵母双杂交，酵母三杂交文库的筛选。