如何用流式检测细胞凋亡_流式检测

首先，明确一下细胞凋亡和坏死的区别细胞凋亡(apoptosis)是一件主动性细胞死亡事件，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控，是细胞为更好地适应环境而主动争取的一种死亡过程。具体表现为：出芽形成凋亡小体、核小体间DNA的切割，凋亡小体被吞噬和消化等几个连续过程等细胞坏死（necrosis）则是一件被动的过程，是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程，即病理条件下，自体损伤的一种现象。具体表现为：细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，会引起局部严重的炎症反应一、流式检测细胞凋亡的原理AnnexinV和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的该方法简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，具体原理如下：AnnexinⅤ（膜联蛋白V）是一种分子量为35-36kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合，将AnnexinV进行荧光素FITC标记，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium,PI）是一种可与DNA结合的染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此，将AnnexinV与PI联合使用时，便可用来鉴别活细胞，凋亡细胞及死亡细胞。二、实验操作步骤收集细胞：取适量的对数生长期细胞接种于6孔板中，在相应的条件下（如药物）处理相应时间后，收集细胞，注意要合并上清和消化下来的细胞（注：悬浮细胞直接离心即可）；清洗细胞：用预冷的PBS洗2遍细胞；

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