乌鲁木齐酵母双杂交文库实验-西宁酵母单杂交文库构建-西安淳风生物科技有限公司

乌鲁木齐酵母双杂交文库实验-西宁酵母单杂交文库构建-西安淳风生物科技有限公司 近日，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所杨青川研究员及其科研团队在国际上首次发现了紫花苜蓿开花调控基因——CCCH类型锌指蛋白MsZFN基因。这将为紫花苜蓿开花控制调控机制研究，加快紫花苜蓿早熟、耐盐新品系选育奠定基础。相关研究结果已发表于《植物科学（Plant Science）》上。　据杨青川介绍，锌指蛋白是广泛分布于生物体内的一类转录因子，在生物体内起到转录调控的作用，现已经有大量的锌指蛋白被分离和鉴定出来，但CCCH类型锌指蛋白作为其中的一类，功能研究相对较少，目前为止，尚未有MsZFN及其同源基因功能的相关报导。　杨青川团队在研究紫花苜蓿MsZFN基因耐盐调控机制的同时，发现该基因在叶中表达量最高，花中表达量最低，在黑暗条件下，表达量上升。通过双分子荧光互补实验证实，MsZFN蛋白能够在植物细胞内形成二聚体或多聚体。通过农杆菌介导的方法获得转基因植物，发现该基因过量表达能够明显推迟转基因植物的开花时间。（通讯员 邬震坤） 　　郝东云介绍，从技术链条来看，转基因玉米新品种的培育划分为上游功能基因研究、中游的新材料创制和评价，下游的新品种选育及产业化三大部分。郝东云同时介绍，整个研发到获得认证的过程或需要10年。转基因玉米研发首先要做的是表达载体构建。即将需要进行转基因操作的目的基因，通过分子生物学的手段进行分离，然后构建到表达载体上，将构建好的表达载体转化到农杆菌菌株中，低温保存待用。这个步骤需要在封闭的实验室完成。其次还需要的步骤包括遗传转化、植株再生等，最后放在花盆培育的植株将会慢慢开花结实。但长大结实的植株并不意味着转基因玉米研发获得成功。“我们要从上千上万个植株中选出最满意的性状，然后转育到合适的品种里，转化率一般低于10%。”郝东云解释。 实验原理： 酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中利用转录因子GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD与激活结构域GAL4-AD的特异载体，分别与基因的ORFs融合，转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。 实验目的： 酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。 实验步骤 1.1.RNA提取 1.2.mRNA分离 1.3.cDNA合成 1.4.cDNA长度分级 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂交载体(pGADT7-Rec)进行infusion重组 1.6.重组后产物转化感受态细胞 1.7.文库铺板检测与菌液保存 技术指标 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越长越好，较长的片段可能会漏筛部分较小片段的互作基因）， 2. 重组率＞90%， 3. 库容≥1 x 108 transformants， 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。 交付结果 1. 文库构建报告（电子版）， 2. 文库构建图片（电子版）， 3. 转化到酵母细胞的双杂交文库甘油菌。 服务周期 25个工作日 材料条件 客户提供组织或细胞 实验原理： 酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中利用转录因子GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD与激活结构域GAL4-AD的特异载体，分别与基因的ORFs融合，转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。 实验目的： 酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。 实验步骤 1.1.RNA提取 1.2.mRNA分离 1.3.cDNA合成 1.4.cDNA长度分级 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂交载体(pGADT7-Rec)进行infusion重组 1.6.重组后产物转化感受态细胞 1.7.文库铺板检测与菌液保存 技术指标 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越长越好，较长的片段可能会漏筛部分较小片段的互作基因）， 2. 重组率＞90%， 3. 库容≥1 x 108 transformants， 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。 交付结果 1. 文库构建报告（电子版）， 2. 文库构建图片（电子版）， 3. 转化到酵母细胞的双杂交文库甘油菌。

西宁双荧光素酶报告基因技术服务/长春emsa实验/西安淳风生物科技有限公司
服务周期 25个工作日 材料条件 客户提供组织或细胞 实验原理： 酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相互作用。转录因子可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种DNA结合与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在GAL4系统中利用转录因子GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD与激活结构域GAL4-AD的特异载体，分别与基因的ORFs融合，转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。 实验目的： 酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。 实验步骤 1.1.RNA提取 1.2.mRNA分离 1.3.cDNA合成 1.4.cDNA长度分级 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂交载体(pGADT7-Rec)进行infusion重组 1.6.重组后产物转化感受态细胞 1.7.文库铺板检测与菌液保存 技术指标 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越长越好，较长的片段可能会漏筛部分较小片段的互作基因）， 2. 重组率＞90%， 3. 库容≥1 x 108 transformants， 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。 交付结果 1. 文库构建报告（电子版）， 2. 文库构建图片（电子版）， 3. 转化到酵母细胞的双杂交文库甘油菌。 服务周期 25个工作日 材料条件 客户提供组织或细胞 　　由于最近的研究发现TET蛋白能够将5mc修饰转变为5hmc修饰，作者希望了解是否TET参与了T细胞活化后的分化过程。通过RT-PCR，作者首先鉴定出在多种TET蛋白成员中，TET2在各类T细胞中的表达量最高，通过染色质免疫共沉淀的手段，作者证明了TET2特异性结合在具有5hmc修饰的基因区域，如IFN-g，IL-17等，而在缺失细胞特异性转录因子后，这一富集现象则不再明显。这一结果说明TET2可能调控了这些基因的去甲基化过程，而这一作用依赖于特异性的转录因子。 .西安淳风生物科技有限公司___乌鲁木齐酵母双杂交文库实验-西宁酵母单杂交文库构建-西安淳风生物科技有限公司

相关资讯查看>>